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Investigación
Development of new diagnostic methods for invasive fungal infection
Líneas de investigación
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El diagnóstico de la infección fúngica invasora (IFI) es complicado y con frecuencia se retrasa ya que en muchas ocasiones a la falta de sospecha clínica se le suma la falta de herramientas diagnósticas eficaces. Esta línea de investigación se inició en el año 2003, primero liderada por el Dr. Manuel Cuenca-Estrella y posteriormente por la Dra. María José Buitrago con el objetivo general de desarrollar nuevas herramientas, basadas en la PCR en tiempo Real, para un diagnóstico rápido de IFI. Los objetivos concretos que se han ido alcanzando a lo largo de estos años han sido los siguientes:
Detección precoz de hongos causantes de infecciones fúngicas oportunistas más frecuentes en pacientes inmunodeprimidos (Aspergilosis y Candidiasis invasoras)
Se han desarrollado y validado técnicas de PCR en tiempo Real en formato multiplex para el cribado de pacientes en riesgo de padecer estas infecciones, así como para el diagnóstico en pacientes con sospecha.
Detección de IFIs causadas por hongos emergentes (Escedosporiosis, Fusariosis etc...)
El aumento de especies raras o poco frecuentes causantes de IFI hizo necesario el desarrollo de técnicas para su detección
Detección “panfúngica”
Para aquellos casos en los que no exista evidencia clara del hongo causante de la infección se han desarrollado técnicas basadas en PCR en tiempo Real.
Mejora del diagnóstico y la identificación de los hongos causantes de micosis importadas (micosis endémicas)
Debido al aumento de la inmigración y los viajes a lugares exóticos en los últimos años se ha producido un incremento de las micosis importadas en España, en concreto de aquellas causadas por hongos endémicos de determinadas regiones, los cuales son además patógenos primarios. Este objetivo es relevante en el contexto de una región no-endémica ya que existe falta de experiencia en el manejo de estas infecciones y las técnicas diagnósticas disponibles son muy escasas. A lo largo de estos años se han desarrollado y validado distintas técnicas para el diagnóstico rápido de estas micosis y se han realizado diferentes trabajos encaminados a un mejor conocimiento de los hongos que las causan.
Las técnicas desarrolladas a lo largo de estos años se han incorporado a la Cartera de Servicios del Centro Nacional de Microbiología para ofrecerlas al Sistema Nacional de Salud. Además, algunas de ellas se han patentado.
Proyectos de investigación
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1. Nombre del proyecto: Mejora del pronóstico del paciente con riesgo de enfermedad fúngica invasora: estudio de susceptibilidad del huésped y desarrollo de nuevos métodos de diagnóstico clínico. Entidad/es financiadora/s: Instituto de Salud Carlos III. Fecha de inicio-fin: 01/01/2018 - 31/12/2020. Cuantía: 72.000 €. Investigadores principales (IP, Co-IP,...): María José Buitrago Serna/Laura Alcazar Fuoli
2. Nombre del proyecto: Red española de Investigación en Patologías infecciosas REIPI
Entidad/es financiadora/s: ISCIII-FEDER Fecha de inicio-fin: 01/01/2017 - 31/12/2021
Cuantía total: 195.612 €. Coordinador: Emilia Mellado
3. Nombre del proyecto: Desarrollo y validación de un método de detección de tipo “point of care”. Entidad/es financiadora/s: Instituto de Salud Carlos III. Fecha de inicio-fin: 01/01/2015 - 31/12/2017. Cuantía total: 46.000 €. Investigador principal: María José Buitrago.
4. Nombre del proyecto: European Research Infrastructure on Highly Pathogenic Agents 2-ERINHA2(Horizon2020). Nombre del programa: FP7-Infraestructuras-2015. Programa marco. THEME (INFRA-2010-2.2.8: High Security BLS4 Laboratory). Entidad financiadora: Unión Europea. Fecha de inicio-fin: 01/01/2016 - 01/06/2017. Cuantía total: 524.848 €. Cuantía subproyecto: 141.562 €. Coordinador (IP): Raoul Hervé.
5. Nombre del proyecto: Iberian network of laboratories of Biological Alert Acreditation of methods for detection of highly pathogenic agents/IB-BiOALERNET Entidad/es financiadora/s: DG-Home (Unión Europea). Fecha de inicio-fin: 2013 – 2015. Cuantía total: 629.382,67 €. Coordinador (IP): Carmen Cañavate
6. Nombre del proyecto: Desarrollo de nuevos métodos de diagnóstico e identificación de especies fúngicas causantes de neumonías oportunistas. Entidad/es financiadora/s: ISCIII. Fecha de inicio-fin: 2012 – 2015. Cuantía total: 67.429,67 €. Investigador principal: María José Buitrago.
7. Nombre del proyecto: European Research Infrastructure on Highly Pathogenic Agents 2-ERINHA2 (Horizon2020). Nombre del programa: FP7-Infraestructuras-2015. Programa marco. THEME (INFRA-2010-2.2.8: High Security BLS4 Laboratory. Entidad financiadora: Unión Europea. Fecha de inicio-fin: 01/01/2010 - 31/12/2013. Cuantía total: 4.859.782,5 €. Coordinador (IP): Raoul Hervé.
8. Nombre del proyecto: RED iberoamericana de diagnóstico molecular de las infecciones endémicas y oportunistas. Entidad/es financiadora/s: CYTED-AECI. Fecha de inicio-fin: 2008 – 2009. Cuantía total: 70.000 €. Investigador principal: Luz-Elena Cano
9. Nombre del proyecto: “Desarrollo de nuevos métodos de diagnóstico en alertas biosanitarias relacionadas con la Micología”. Entidad/es financiadora/s: Instituto de Salud Carlos III. Fecha de inicio-fin: 2007 – 2009. Cuantía total: 58.500 €. Investigador Principal: María José Buitrago
Publicaciones destacadas
Fernandez-Garcia MD, Simon-Loriere E, Kebe O, Sakuntabhai A, Ndiaye K. Identification and molecular characterization of the first complete genome sequence of Human Parechovirus type 15. Sci Rep. 2020 Apr 21
Fernandez-Garcia MD, Simon-Loriere E, Kebe O, Sakuntabhai A, Ndiaye K. Identification and molecular characterization of the first complete genome sequence of Human Parechovirus type 15. Sci Rep. 2020 Apr 21;10(1):6759. doi: 10.1038/s41598-020-63467-w. PMID: 32317760; PMCID: PMC7174385.
Casas-Alba D, Valero-Rello A, Muchart J, Armangué T, Jordan I, Cabrerizo M, Molero-Luís M, Artuch R, Fortuny C, Muñoz-Almagro C, Launes C. Cerebrospinal Fluid Neopterin in Children With Enterovirus-Related Brainstem Encephalitis. Pediatr Neurol. 2019 Jul
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González-Sanz R, Taravillo I, Reina J, Navascués A, Moreno-Docón A, Aranzamendi M, Romero MP, Del Cuerpo M, Pérez-González C, Pérez-Castro S, Otero A, Cabrerizo M. Enterovirus D68-associated respiratory and neurological illness in Spain, 2014-2018.
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Monocytic Myeloid-Derived Suppressor Cells Accumulate in Renal Transplant Patients and Mediate CD4(+) Foxp3(+) Treg Expansion
Luan Y, Mosheir E, Menon MC, Wilson D, Woytovich C, Ochando J, Murphy B. Monocytic Myeloid-Derived Suppressor Cells Accumulate in Renal Transplant Patients and Mediate CD4(+) Foxp3(+) Treg Expansion. 2013. Am J Transplant.13(12):3123-31.
PUBMED DOIRiquelme P, Haarer J, Kammler A, Walter L, Tomiuk S, Ahrens N, Goecze I, Wege A, Fändrich F, Schlitt H, Banas B, Lutz M, Sawitzki B, Ochando J, Geissler E and Hutchinson J. Generation of BTNL8+ TIGIT+ Tregs by Human Regulatory Macrophages Before Kidney Transplantation. Nat Commun.
Riquelme P, Haarer J, Kammler A, Walter L, Tomiuk S, Ahrens N, Goecze I, Wege A, Fändrich F, Schlitt H, Banas B, Lutz M, Sawitzki B, Ochando J, Geissler E and Hutchinson J. Generation of BTNL8+ TIGIT+ Tregs by Human Regulatory Macrophages Before Kidney Transplantation. Nat Commun. 2018; Jul 20;9(1):2858. PMID: 30030423.
Inhibiting Inflammation with Myeloid Cell-Specific Nanobiologics Promotes Organ Transplant Acceptance
Braza MS, Lameijer M, Sanchez-Gaytan B, Arts R, Pérez-Medina C, Conde P, Brahmachary M, van der Touw W, Fay F, Kluza E, Kossatz S, Stroes E, Kroon J, Dress R, Salem F, Rialdi A, Reiner T, Boros P, van Leent M, Strijkers G, Calcagno C, Ginhoux F, Marazzi I, Lutgens E, Nicolaes G, Weber C, Swirski F, Nahrendorf M, Fisher E, Fayad Z, Duivenvoorden R, Netea M, Mulder WJ, and Ochando J. Inhibiting Inflammation with Myeloid Cell-Specific Nanobiologics Promotes Organ Transplant Acceptance.Immunity. 2018; 20;49(5):819-828.e6. PMID: 30413362.
PUBMED DOIFernandez-Garcia MD, Volle R, Joffret ML, Sadeuh-Mba SA, Gouandjika-Vasilache I, Kebe O, Wiley MR, Majumdar M, Simon-Loriere E, Sakuntabhai A, Palacios G, Martin J, Delpeyroux F, Ndiaye K, Bessaud M. Genetic Characterization of Enterovirus A71 Circulating in Africa.
Fernandez-Garcia MD, Volle R, Joffret ML, Sadeuh-Mba SA, Gouandjika-Vasilache I, Kebe O, Wiley MR, Majumdar M, Simon-Loriere E, Sakuntabhai A, Palacios G, Martin J, Delpeyroux F, Ndiaye K, Bessaud M. Genetic Characterization of Enterovirus A71 Circulating in Africa. Emerg Infect Dis. 2018 Apr;24(4):754-757. doi: 10.3201/eid2404.171783. PMID: 29553325; PMCID: PMC5875259.
Leon KE, Schubert RD, Casas-Alba D, Hawes IA, Ramachandran PS, Ramesh A, Pak JE, Wu W, Cheung CK, Crawford ED, Khan LM, Launes C, Sample HA, Zorn KC, Cabrerizo M, Valero-Rello A, Langelier C, Muñoz-Almagro C, DeRisi JL, Wilson MR. Genomic and serologic characterization of enterovirus A71 brainstem encephalitis. Neurol Neuroimmunol Neuroinflamm. 2020
Leon KE, Schubert RD, Casas-Alba D, Hawes IA, Ramachandran PS, Ramesh A, Pak JE, Wu W, Cheung CK, Crawford ED, Khan LM, Launes C, Sample HA, Zorn KC, Cabrerizo M, Valero-Rello A, Langelier C, Muñoz-Almagro C, DeRisi JL, Wilson MR. Genomic and serologic characterization of enterovirus A71 brainstem encephalitis. Neurol Neuroimmunol Neuroinflamm. 2020 Mar 5;7(3):e703. doi: 10.1212/NXI.0000000000000703. PMID: 32139440; PMCID: PMC7136061.
González-Sanz R, Casas-Alba D, Launes C, Muñoz-Almagro C, Ruiz-García MM, Alonso M, González-Abad MJ, Megías G, Rabella N, Del Cuerpo M, Gozalo-Margüello M, González-Praetorius A, Martínez-Sapiña A, Goyanes-Galán MJ, Romero MP, Calvo C, Antón A, Imaz M, Aranzamendi M, Hernández-Rodríguez Á, Moreno-Docón A, Rey- Cao S, Navascués A, Otero A, Cabrerizo M. Molecular epidemiology of an enterovirus A71 outbreak associated with severe neurological disease, Spain, 2016. Euro Surveill. 2019
González-Sanz R, Casas-Alba D, Launes C, Muñoz-Almagro C, Ruiz-García MM, Alonso M, González-Abad MJ, Megías G, Rabella N, Del Cuerpo M, Gozalo-Margüello M, González-Praetorius A, Martínez-Sapiña A, Goyanes-Galán MJ, Romero MP, Calvo C, Antón A, Imaz M, Aranzamendi M, Hernández-Rodríguez Á, Moreno-Docón A, Rey- Cao S, Navascués A, Otero A, Cabrerizo M. Molecular epidemiology of an enterovirus A71 outbreak associated with severe neurological disease, Spain, 2016. Euro Surveill. 2019 Feb;24(7):1800089. doi: 10.2807/1560-7917.ES.2019.24.7.1800089. PMID: 30782267; PMCID: PMC6381658.
Spanish Afp Surveillance Working Group. Acute flaccid paralysis (AFP) surveillance: challenges and opportunities from 18 years' experience, Spain, 1998 to 2015. Euro Surveill.
Spanish Afp Surveillance Working Group. Acute flaccid paralysis (AFP) surveillance: challenges and opportunities from 18 years' experience, Spain, 1998 to 2015. Euro Surveill. 2018 Nov;23(47):1700423. doi: 10.2807/1560-7917.ES.2018.23.47.1700423. PMID: 30482263; PMCID: PMC6341937.
Molecular Epidemiology of Human Parechoviruses in Children With Acute Respiratory Infection in Spain
M Cabrerizo*, C Calvo, G Trallero, ML García-García, M Arroyas, V Sánchez, F Pozo, I Casas. Molecular epidemiology of human parechoviruses children with acute respiratory infection in Spain. Pediatric Infect Dis J 32:802-3 (2013).
PUBMED DOIIdentification of novel Betaherpesviruses in iberian bats reveals parallel evolution
Pozo F, Juste J, Vázquez-Morón S., Aznar-López C, Ibáñez C, Garin I, Aihartza J, Casa I, Tenorio A, Echevarría JE. Identification of novel Betaherpesviruses in iberian bats reveals parallel evolution. PLoS ONE. 2016. 11(12): e0169153. doi:10.1371/journal.pone.0169153
PUBMED DOIDetection of Rhabdovirus viral RNA in oropharyngeal swabs and ectoparasites of Spanish bats
Aznar C, Vazquez-Moron S, Martson D, Juste J, Ibáñez C, Berciano JM, Salsamendi E, Aihartza J, Banyard AC, McElhinney L, Fooks AR, Echevarria JE. Detection of Rhabdovirus viral RNA in oropharyngeal swabs and ectoparasites of Spanish bats. Journal of General Virology. 2013. 94: 69-75.
PUBMED DOIGenomic non-coding regions reveal hidden patterns of mumps virus circulation in Spain, 2005 to 2015
Gavilán AM, Fernández-García A*, Rueda A, Castellanos A, Masa J, López-Perea N, Torres de Mier MV, de Ory F, Echevarría JE. Non-coding sequences reveal hidden patterns of mumps virus circulation in Spain, 2005 to 2015. Eurosurveillance,2018, 23(15): 1-8. *Corresponding author.
PUBMED DOIFirst cases of European Bat Lyssavirus type 1 in Iberian serotine bats: implications for the molecular epidemiology of bat rabies in Europe.
Mingo-Casas P, Sandonís V, Obón E, Berciano JM, Vázquez-Morón S, Juste J, Echevarría JE. First cases of European Bat Lyssavirus type 1 in Iberian serotine bats: implications for the molecular epidemiology of bat rabies in Europe. Plos Neglected Tropical Diseases, 2018: 12(4): e0006290.
PUBMED DOILast cases of rubella and congenital rubella syndrome in Spain, 1997–2016: The success of a vaccination program
Seppälä EM, López-Perea N, Torres de Mier MV, Echevarría JE, Fernández García A, Masa-Calles J. Last cases of rubella and congenital rubella syndrome in Spain, 1997–2016: The success of a vaccination program. Vaccine, 2019, 37(1):169-175.
PUBMED DOICombination of Cefditoren and N-acetyl-l-Cysteine Shows a Synergistic Effect against Multidrug-Resistant Streptococcus pneumoniae Biofilms
Llamosí M, Sempere J, Coronel P, Gimeno M, Yuste J, Domenech M. Combination of Cefditoren and N-acetyl-l-Cysteine Shows a Synergistic Effect against Multidrug-Resistant Streptococcus pneumoniae Biofilms. Microbiol Spectr. 2022 Dec 21;10(6):e0341522
PUBMED DOIClearance of mixed biofilms of Streptococcus pneumoniae and methicillin-susceptible/resistant Staphylococcus aureus by antioxidants N-acetyl-L-cysteine and cysteamine
Sempere J, Llamosí M, Román F, Lago D, González-Camacho F, Pérez-García C, Yuste J, Domenech M. Clearance of mixed biofilms of Streptococcus pneumoniae and methicillin-susceptible/resistant Staphylococcus aureus by antioxidants N-acetyl-L-cysteine and cysteamine. Sci Rep. 2022 Apr 23;12(1):6668
PUBMED DOIClinical Relevance and Molecular Pathogenesis of the Emerging Serotypes 22F and 33F of Streptococcus pneumoniae in Spain
Sempere J, de Miguel S, González-Camacho F, Yuste J, Domenech M. Clinical Relevance and Molecular Pathogenesis of the Emerging Serotypes 22F and 33F of Streptococcus pneumoniae in Spain. Front Microbiol. 2020 Feb 27;11:309.
PUBMED DOIContent with Investigacion .
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Leticia Bernal Martínez
Staff Scientist
ORCID code: 0000-0002-1694-5522
Leticia Bernal Martínez obtaned her PhD at the CNM, ISCIII and she is currently staff at the Mycology Laboratory. She has more than fifteen years of experience in Molecular Mycology. His research has focused on the development of new diagnostic techniques for invasive fungal infection.
List of staff
Información adicional
RECENT COLLABORATIONS
1. Dr. Marco Teixeira. Visiting professor at the University of Brasilia (UnB). Affiliated researcher at Northern Arizona University (NAU)
2. Dr. Alexandre Alanio. Researcher at Hôpital St. Louis, Paris. France
3. Dr. Dunja Wilmes. Researcher at the Robert Koch Institute. Sedan. Germany.
4. Dr. Paula Sampaio. Center for Molecular and Environmental Biology (CBMA), Department of Biology, University of Minho, Braga, Portugal
5. Dr. Rosely Zancope-Oliveira. Professor at the Oswaldo Cruz Foundation. Rio de Janeiro, Brazil.
6. Dr. Ana Cecilia Mesa Arango. Professor at the University of Antioquia. Medellin. Colombia
7. Dr. Néstor Pakasa. Professor, Kinshasa University Hospital, Kinshasa, Democratic Republic of the Congo
8. Dr. David aka. Researcher at the Félix Houphouët-Boigny University, Abidjan, Ivory Coast
PATENTS
a) Registered industrial property title: “Development of a rapid method for the diagnosis of histoplasmosis and/or paracoccidioidomycosis by multiplex Real-Time PCR with Molecular Beacon type probe initiators.” Inventors: María José Buitrago Serna; Manuel Cuenca Estrella; Juan Luis RodriguezTudela; Alicia Gómez López. Rights holder entity: Carlos III Health Institute. Application number: P200802665. Country of registration: Spain. Registration date: 09/19/2008. Grant date: 09/14/2011
b) Registered industrial property title: Riboflavin-synthese in Ashbya gossypii. Inventors/authors/breeders: Jose Luis Revuelta Doval; María José Buitrago Serna; Maria de los Angeles Santos García. Rights holder entity: BASF Aktiengesellschaft. Application number: CA 2186403. Registration date: 03/25/1994. Grant date: 01/24/2006
c) Registered industrial property title: Riboflavin-Synthese in Hefen. Inventors/authors/breeders: Jose Luis Revuelta Doval; Jose Javier García Ramírez; Maria de Los Angeles Santos García; Gloria Angélica González; María José Buitrago Serna. Rights holder entity: BASF Aktiengesellschaft. Application number: EP19940901793. Registration date: 11/19/199. Grant date: 05/07/1997
DIRECTION OF DOCTORAL THESES
1. Title: Development of new methods for diagnosis and identification of fungal species that cause opportunistic pneumonia. Implementation entity: Complutense University-ISCIII. Student: Clara Valero Fernández. Qualification obtained: Excellent Cum Laude. Defense date: 05/19/2017
2. Title: Development and Validation of diagnostic techniques for invasive fungal infection. Implementation entity: Complutense University of Madrid-ISCIII. Student: Sara Gago Prieto. Grade obtained: Excellent cum laude. Defense date: 07/18/2014
3. Title: Development of techniques based on real-time PCR for the diagnosis of invasive fungal infections. Implementation entity: Complutense University of
Madrid-ISCIII. Student: Leticia Bernal Martinez. Grade obtained: Excellent cum laude. Defense date: 2010
RECENT COLLABORATIONS
1. Dr. Marco Teixeira. Visiting professor at the University of Brasilia (UnB). Affiliated researcher at Northern Arizona University (NAU)
2. Dr. Alexandre Alanio. Researcher at Hôpital St. Louis, Paris. France
3. Dr. Dunja Wilmes. Researcher at the Robert Koch Institute. Sedan. Germany.
4. Dr. Paula Sampaio. Center for Molecular and Environmental Biology (CBMA), Department of Biology, University of Minho, Braga, Portugal
5. Dr. Rosely Zancope-Oliveira. Professor at the Oswaldo Cruz Foundation. Rio de Janeiro, Brazil.
6. Dr. Ana Cecilia Mesa Arango. Professor at the University of Antioquia. Medellin. Colombia
7. Dr. Néstor Pakasa. Professor, Kinshasa University Hospital, Kinshasa, Democratic Republic of the Congo
8. Dr. David aka. Researcher at the Félix Houphouët-Boigny University, Abidjan, Ivory Coast
PATENTS
a) Registered industrial property title: “Development of a rapid method for the diagnosis of histoplasmosis and/or paracoccidioidomycosis by multiplex Real-Time PCR with Molecular Beacon type probe initiators.” Inventors: María José Buitrago Serna; Manuel Cuenca Estrella; Juan Luis RodriguezTudela; Alicia Gómez López. Rights holder entity: Carlos III Health Institute. Application number: P200802665. Country of registration: Spain. Registration date: 09/19/2008. Grant date: 09/14/2011
b) Registered industrial property title: Riboflavin-synthese in Ashbya gossypii. Inventors/authors/breeders: Jose Luis Revuelta Doval; María José Buitrago Serna; Maria de los Angeles Santos García. Rights holder entity: BASF Aktiengesellschaft. Application number: CA 2186403. Registration date: 03/25/1994. Grant date: 01/24/2006
c) Registered industrial property title: Riboflavin-Synthese in Hefen. Inventors/authors/breeders: Jose Luis Revuelta Doval; Jose Javier García Ramírez; Maria de Los Angeles Santos García; Gloria Angélica González; María José Buitrago Serna. Rights holder entity: BASF Aktiengesellschaft. Application number: EP19940901793. Registration date: 11/19/199. Grant date: 05/07/1997
DIRECTION OF DOCTORAL THESES
1. Title: Development of new methods for diagnosis and identification of fungal species that cause opportunistic pneumonia. Implementation entity: Complutense University-ISCIII. Student: Clara Valero Fernández. Qualification obtained: Excellent Cum Laude. Defense date: 05/19/2017
2. Title: Development and Validation of diagnostic techniques for invasive fungal infection. Implementation entity: Complutense University of Madrid-ISCIII. Student: Sara Gago Prieto. Grade obtained: Excellent cum laude. Defense date: 07/18/2014
3. Title: Development of techniques based on real-time PCR for the diagnosis of invasive fungal infections. Implementation entity: Complutense University of
Madrid-ISCIII. Student: Leticia Bernal Martinez. Grade obtained: Excellent cum laude. Defense date: 2010